BIOKEMISKA TESTER: TYPER, VAD DE ÄR FÖR OCH BETYDELSE - BIOLOGI - 2025

De biokemiska testerna inom mikrobiologi är en uppsättning testkemikalier som transporteras till de mikroorganismer som finns i ett prov för att identifiera dem ; Dessa mikroorganismer är vanligtvis bakterier. Det finns ett stort antal biokemiska tester tillgängliga för en mikrobiolog.

Valet av dessa tester baseras emellertid på preliminära fynd, till exempel Gram-fläckmönstret och tillväxtegenskaper, som gör att bakterierna kan tilldelas en viss kategori. Biokemiska tester är huvudsakligen baserade på metabolismegenskaperna hos varje bakterietyp.

Inte alla bakterier har samma egenskaper, så det undersöks om de har något speciellt enzym genom att tillsätta substratet och vänta på att reaktionen ska inträffa. Vanligtvis ges denna bestämning genom en förändring i färg eller pH i odlingsmediet.

Mindre än 15 biokemiska tester krävs ofta för pålitlig identifiering av en bakterie ner till artnivån. Att utföra mer biokemiska tester kan öka förtroendet för identifieringen.

De flesta av dessa biokemiska tester utförs på serum eller blodplasma. De kan emellertid också utföras på andra biologiska utsöndringar såsom: urin, cerebrospinalvätska, pleuravätska och avföring, bland andra.

Klassificering

Biokemiska tester kan klassificeras i 3 grupper:

Universell

Det är de tester som kan utföras på vilket prov som helst och som vägledar mikrobiologen om följande biokemiska tester som måste utföras för att få en pålitlig identifiering.

Exempel

Katalas- och oxidastest.

differentialer

Det är de tester som utförs för att identifiera de mikroorganismer som finns i provet ner till artnivån.

Identifiering görs baserat på resultaten från en kombination av tester, eftersom enskilda resultat inte är tillräckligt informativa för att identifiera dem.

Exempel

IMViC-tester och tester av sockeranvändning.

Specifika

De är specifika tester för en viss uppsättning av arter eller för att subtypa en art. Dessa tester görs vanligtvis för att bekräfta eller identifiera på undernivå. De enskilda testerna är informativa i sig själva.

Exempel

Y-Glutamylaminopeptidas-testet.

Typer av biokemiska tester

Katalasstestet

Katalasstestet är ett test för att demonstrera närvaron av katalasenzym genom att bryta väteperoxid till syre och vatten. En liten mängd bakterier sätts till en droppe väteperoxid (3%) på objektglaset.

Katalasstestet är ett enkelt test som används av mikrobiologer för att identifiera bakteriesorter och för att bestämma förmågan hos vissa mikrober att bryta ner väteperoxid genom att producera enzymkatalaset.

Om syrebubblor observeras betyder det att bakterierna har enzymet katalas, eftersom det katalyserar nedbrytningen av väteperoxid till syre och vatten. Organismen sägs sedan vara katalasepositiv (t.ex. Staphylococcus aureus).

Oxidastestet

Detta test används för att identifiera mikroorganismer som innehåller enzymet cytokromoxidas (viktigt i elektrontransportkedjan). Det används vanligtvis för att skilja mellan familjerna Enterobacteriaceae och Pseudomadaceae.

Cytokromoxidas överför elektroner från elektrontransportkedjan till syre (den slutliga elektronacceptorn) och reducerar den till vatten. Konstgjorda elektrondonatorer och acceptormolekyler tillhandahålls i oxidastestet.

När elektrondonorn oxideras genom inverkan av cytokromoxidas blir mediet mörklila och betraktas som ett positivt resultat. Mikroorganismen Pseudomonas aeruginosa är ett exempel på en oxidas-positiv bakterie.

Saltat Mannitol Agar (MSA) Test

Denna typ av test är både selektiv och differentiell. MSA kommer att välja organismer som kan leva i miljöer med höga saltkoncentrationer, såsom Staphylococcus-arter i motsats till Streptococcus-arter, vars tillväxt hämmas under dessa förhållanden.

Differentialkomponenten i detta test är mannitolsocker. Organismer som kan använda mannitol som livsmedelskälla kommer att producera biprodukter från jäsning, som är sura och därmed sänker mediets pH.

Mediets surhet gör att pH-indikatorn, fenolröd, blir gul. Exempel på arter av bakterier som kan differentieras med denna metod är: Staphylococcus aureus (positivt eftersom det fermenterar mannitol) och Staphylococcus epidermidis (negativt eftersom det inte fermenterar mannitol).

Koagulasetest

Koagulas är ett enzym som hjälper blodproppar i blodet. Detta test utförs på Gram-positiva och katalasepositiva bakterier för att identifiera Staphylococcus aureus (koagulas-positiva). I själva verket är koagulas en virulensfaktor för denna bakterieart.

Koaguleringsbildning runt en infektion orsakad av denna bakterie skyddar förmodligen den från fagocytos. Detta test är mycket användbart när du vill skilja Staphylococcus aureus från andra Staphylococcus-arter som är koagulas-negativa.

Ureas-testet

Detta test används för att identifiera bakterier som kan hydrolysera urea, med användning av enzymet ureas. Det används ofta för att särskilja släktet Proteus från andra enteriska bakterier.

Hydrolys av urea producerar ammoniak som en av dess produkter. Denna svaga bas ökar pH-värdet på mediet över 8,4 och pH-indikatorn (fenolröd) förändras från gult till rosa. Ett exempel på en ureaspositiva bakterier är Proteus mirabilis.

Vad är biokemiska tester för?

Biokemiska tester i mikrobiologi används för att diagnostisera sjukdomar orsakade av mikrober och för att övervaka behandlingar som administreras för att bekämpa dem. Dessutom används de för screening av infektionssjukdomar och för deras prognos.

Den biokemiska identifieringen av mikroorganismer ger en uppfattning om vad dessa mikroorganismer är kapabla, vilket är möjligt att diskriminera olika stammar av samma art med specifika biokemiska profiler.

Skillnader i specifika enzymaktiviteter informerar mikroorganismens ekologi, fysiologi eller naturliga livsmiljö, vilket i vissa fall kan anses vara viktig information.

Betydelse

Strukturella skillnader i form, storlek och arrangemang av bakterier hjälper lite i identifieringsprocessen, eftersom det finns många arter av bakterier som liknar form, storlek och arrangemang.

Av denna anledning baseras identifiering av bakterier i slutändan främst på skillnader i deras biokemiska aktiviteter.

Varje arter av bakterier har en väldefinierad uppsättning metaboliska aktiviteter som skiljer sig från alla andra arter. Dessa biokemiska "fingeravtryck" är egenskaper som kontrolleras av bakterieenzymer.

Således är biokemiska tester viktiga eftersom de hjälper forskaren att korrekt identifiera patogenerna som finns i ett prov och på detta sätt att kunna rekommendera lämplig behandling till patienten.

referenser

1. Beckett, G., Walker, S. & Rae, P. (2010). Clinical Biochemistry (8: e upplagan). Wiley-Blackwell.
2. Clarke, PH, & Cowan, ST (1952). Biokemiska metoder för bakteriologi. Journal of General Microbiology, 6 (1952), 187-197.
3. Gaw, A., Murphy, M., Srivastava, R., Cowan, R., St, D. & O'Reilly, J. (2013). Clinical Biochemistry (5: e upplagan). Elsevier Health Sciences.
4. Goldman, E. & Green, L. (2008). Praktisk handbok för mikrobiologi (2: a upplagan). CRC Press.
5. Harrigan, W. (1998). Laboratoriemetoder i matmikrobiologi (3: e upplagan). Academic Press.
6. Vasanthakumari, R. (2009). Praktisk mikrobiologi. BI Publications Pvt Ltd.