FÖRBEREDELSE AV KULTURMEDIER: MÅL OCH STEG - BIOLOGI - 2025

Den Framställningen av odlingsmedia är en rutinmässig metod som används i laboratorier för tillväxten av önskade mikroorganismer. Kulturmedier är fasta, flytande eller halvfasta preparat som har alla nödvändiga näringsämnen för utveckling av en mikrobiell population.

I allmänhet är medlen för odling av mikroorganismer rika på proteiner och aminosyror och innehåller vanligtvis någon komponent som gynnar tillväxten av den organism som ska studeras, såsom vitaminer, blod, serum, bland andra.

Källa: pixabay.com

Det finns inget allmänt eller universellt odlingsmedium, eftersom dess sammansättning varierar beroende på behoven hos mikroorganismen av intresse. Vissa bakterier kan växa i vilket odlingsmedium som helst, men andra har särskilda krav.

Vad består det av?

Mikroorganismer, såsom svampar och bakterier, kan inte studeras individuellt på grund av deras lilla storlek. Av denna anledning måste de odlas på konstgjord väg som möjliggör en betydande befolkningstillväxt.

Om vi ​​till exempel vill studera bakterier måste vi förse dem med rätt förhållanden så att de kan sprida sig och bilda en koloni (som kan observeras med blotta ögat).

Beredningen av odlingsmediet varierar mycket beroende på typen av mikroorganism som ska odlas. Innan du förbereder den är det nödvändigt att känna till de grundläggande näringsbehoven hos arbetsorganismen.

De vanligaste komponenterna som används i kulturmedier kommer att beskrivas nedan för att få en allmän uppfattning om deras beredning:

agar

Det används i kulturer som gelningsmedel och tillsätts när man letar efter ett fast eller halvfast medium. Det första stelningsmedel som användes vid beredningen av media var gelatin, men 1883 introducerades agar till bakteriologiens värld av W. Hesse.

Bakteriologisk agar har som huvudkomponent en polysackarid med komplexa grenar extraherade från alger. Denna förening används som förtjockningsmedel i vanliga livsmedel som glass och sylt.

Det är ett mycket värdefullt element i mikrobiologi av flera skäl. Huvudsakligen på grund av att mikroorganismer inte kan nedbrytas, kondenserar det vid en temperatur på 100 ° C och förblir i flytande tillstånd tills den når 45 ° C eller mindre.

Om du vill framställa ett fast medium bör agarkoncentrationen vara cirka 1,5%, medan halvfetterna bör beredas från 0,3 till 0,5%.

vätskor

Odlingen av patogena organismer behöver kroppsvätskor så att de kan utvecklas som de skulle i sin naturliga miljö. Av detta skäl läggs hela eller defibrillerat blod till. Vätskan tas från ett friskt djur och när den steriliserats tillsätts den till odlingsmediet.

utdrag

De erhålls från olika animaliska delar (såsom kött eller lever) eller grönsaker (frön) och bearbetas för att erhålla ett fast koncentrat i form av en pasta eller pulver. De vanligaste är jäst, malt och kött.

peptoner

Dessa organiska föreningar erhålls genom enzymatisk eller kemisk hydrolys av djur- eller växtvävnader. Syftet är att lägga till innehåll som är rikt på aminosyror, som är de grundläggande proteinerna.

Stötdämpare

"Buffertarna" eller buffertsystemen undviker plötsliga förändringar i pH och hjälper till att upprätthålla det optimala området som kroppen tål.

De flesta organismer kan trivas bra vid ett pH av 7, även om vissa bakterier föredrar alkaliska medier. Det finns emellertid bakterier som motstår pH-variationer mellan värdena 6 och 9.

Hos pH-känsliga arter produceras inte skadan av den överdrivna mängden väte eller hydroxyljoner, utan av ökningen av svaga syror eller baser som kan komma in i cellen.

På samma sätt läggs pH-indikatorer för att övervaka det och undvika avvikelser orsakade av jäsning eller andra processer.

mål

Huvudmålet när man bereder ett kulturmedium är att lägga till alla nödvändiga komponenter för att möjliggöra isolering av den framgångsrika utvecklingen av organismen. Den mest effektiva kombinationen av komponenter och näringsämnen för att uppnå önskat medium måste identifieras.

Både beredning och lagring av mediet är avgörande för att säkerställa framgångsrik tillväxt, eftersom sammansättningen av mediet och tillgängligheten av näringsämnen beror på dessa steg.

Det måste beaktas att odlingen av mikroorganismer är en uppgift som påverkas av flera faktorer utanför odlingsmediet, såsom intensiteten på det mottagna ljuset, temperaturen och surhetsnivån eller alkaliniteten hos mediet. Därför måste var och en av dessa variabler beaktas.

Mediatyper

Baserat på dess sammansättning

Baserat på deras sammansättning finns det tre huvudtyper av grödor: naturliga eller empiriska, halvsyntetiska och definierade syntetiska eller kemiska medier.

Naturlig miljö

I naturliga miljöer är den exakta kompositionen okänd. Dessa inkluderar ingredienser som mjölk, utspädd blod, grönsakssaft, extrakt och infusioner av kött och peptoner. Av ekonomiska skäl tillsätts ofta billiga komponenter såsom sojaxtrakt, vassle, melass, etc.

Halvsyntetiska medier

Det kallas ett halvsyntetiskt medium om dess sammansättning är delvis känd. Varje medium som innehåller agar blir ett semisyntetiskt medium.

Bland dem har vi potatisdextrosagar, czapek-doxagar, havregryn, köttpeptonagar, bland andra exempel.

Syntetiskt eller kemiskt definierat medium

I detta fall är mediets sammansättning - vad gäller mängden källor för kol, kväve, svavel, fosfor och alla andra tillväxtfaktorer som behövs - fullt känd. Det är mycket användbart om du vill få reproducerbara resultat för andra forskare.

För de så kallade "mikroorganismerna med speciella tillväxtkrav" är det nödvändigt att lägga till de nödvändiga komponenterna. Ett exempel på denna typ är Lactobacillus.

Baserat på typen av mikroorganism

På liknande sätt finns det en annan klassificering för kulturmedier baserat på den typ av mikroorganism som kan växa på den. Efter denna princip har vi följande allmänna, berikande, selektiva och differentiella medel. Var och en beskrivs nedan:

Allmänna medier

Dessa stödjer utvecklingen av en mängd olika mikroorganismer. Om någon organisme behöver speciella förutsättningar för dess tillväxt kommer den inte att kunna utvecklas framgångsrikt inom denna typ av kultur.

Anrikningsmedia

Anrikningsmediet stödjer tillväxten av en viss typ av mikroorganism, men ingen substans har tillsatts för att förhindra att andra typer av mikrober växer i den.

Selektivt media

De letar efter den specifika tillväxten av en mikroorganism, kallar det svampar, bakterier, protosor, bland andra. För att göra detta hämmar de andras utveckling.

För att uppnå detta mål kan kemiska föreningar som är dödliga för en bred grupp av mikroorganismer och ofarliga för organismen av intresse tillsättas eller energikällor som endast kan assimileras av målmikroben kan tillsättas.

Selektiva medier används när man tar medicinska prover för att odla en patogen mikroorganism. Här är det nödvändigt att främja tillväxten av patogenen och hämma utvecklingen av den normala mikrobiella floran från patienten.

Vismutsulfitagar tillåter till exempel inte tillväxten av gram-positiva bakterier och ett stort antal bakterier som finns i mag-tarmhålan. Av den anledningen används det för att odla de gramnegativa bakterierna som orsakar tyfoidfeber, Salmonella typhi i fekala prover.

Differentialmedier

Denna typ använder några diagnostiska egenskaper för organismen av intresse (speciella egenskaper i dess metabolism, till exempel) för att kunna identifiera dem mot en annan art som växer i samma miljö.

Både differentiella medier och selektiva medier är mycket användbara inom området klinisk mikrobiologi och folkhälsa, eftersom dessa discipliner måste upptäcka närvaron av specifika mikroorganismer relaterade till patologier eller dåliga hygienförhållanden.

Indikatorämnen kan läggas till kulturen som ger en särskiljande egenskap för den sökta kolonin. Till exempel tillsättes laktos och en pH-indikator till agar-eosin-metylenblått (förkortat EMB) och MacConkey-agar.

Således, när en koloni utvecklas i dessa medier med förmågan att fermentera laktos och producera aldehyder, kan de observeras i en speciell färg.

Steg

För närvarande kan kulturmedier köpas i lyofiliserad form. Därför är beredningen enklare och det enda som återstår att göra är att återhydrera produkten. Innehållet måste vägas (med beaktande av den slutliga mängden som ska beredas) och lösas i destillerat vatten efter alla produktens indikationer.

Innehållet i det flytande mediet måste delas upp i de önskade behållarna (petriskålar, rör etc.) för efterföljande sterilisering. För att fördela det fasta mediet är det nödvändigt att smälta det med en mikrovågsugn eller utsätta materialet för ett vattenbad. Mediets pH måste justeras.

Vanligtvis används agaren i provrör eller petriskålar. Om agaren stelnar i ett lutande läge, med rätt vinkel så att den slutliga ändkanten är diagonal, är detta arrangemang känt som näbb eller lutande rör. När agaren stelnar i ett helt vertikalt läge kallas det "djup".

Efter sterilisering av media - med hjälp av en autoklav - får de svalna. Dessa måste hanteras i en miljö fri från mikroorganismer, det vanligaste är att arbeta med en tänd tändare som säkerställer en aseptisk miljö i deras närhet.

referenser

1. Celis, JE (2006). Cellbiologi: en laboratoriehandbok (vol. 2). Elsevier.
2. Finegold, SM, Bailey, WR, Baron, EJ, Fineglod, SM, & Scott, EG (1991). Bailey Scott: mikrobiologisk diagnos. Pan-American Medical.
3. Olivas, E. (2004). Manual of Practices of Microbiology I and II and Parasitology. Autonoma universitetet i Ciudad Juarez.
4. Schlegel, HG, & Zaborosch, C. (1993). Allmän mikrobiologi. Cambridge University Press.
5. Tortora, GJ, Funke, BR, & Case, CL (2007). Introduktion till mikrobiologi. Panamerican Medical Ed.