NEGATIV FÄRGNING: SKÄL, TEKNIK, FÖRDELAR OCH NACKDELAR - BIOLOGI - 2025

Den negativa färgningen är en metod för speciell färgning för att belysa närvaron av kapseln i vissa mikroorganismer , främst Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae och Cryptococcus neoformans-, från kliniska prover eller rena kulturer.

Det direkta provet som vanligtvis används för att applicera negativ färgning är cerebrospinalvätska. Denna teknik representerar ett snabbt alternativ för den presumtiva diagnosen hjärnhinneinflammation, särskilt Cryptococcus neoformans.

A. Tandsten som är färgad med indisk färg, B. Cryptococcus neoformans var gatti svagt inkapslat när det förekommer i naturen med användning av nigrosin. C. Cryptococcus neoformans var gatti med en tjock kapsel som finns i sin parasitform med nigrosin. D. Cryptococcus neoformans med något utspädd India-bläck. Gisell Quinde, från Wikimedia Commons / CDC, via Wikimedia Commons / Photo Credit: Innehållsleverantörer: CDC / Dr. Leanor Haley, via Wikimedia Commons

På samma sätt kan denna fläck appliceras på sputum och sterila vätskor i allmänhet såväl som på stammar erhållna från unga rena kulturer. Denna teknik använder nigrosin eller Indien bläck för dess utförande; därför är det en mycket enkel och billig metod att tillämpa som ger information av stort diagnostiskt värde på kort tid.

I detta avseende kan varje laboratorium utföra denna färgning. Naturligtvis måste laboratoriet ha kompetent personal som kan känna igen isolerade eller spirande Cryptococcus neoformans-jästar och skilja dem från leukocyter och artefakter som provet kan presentera.

Grund

Nigrosine och India bläck fungerar på liknande sätt; därför kan någon av de två substanserna användas omväxlande.

Denna teknik kallas negativ färgning eftersom den fungerar på ett motsatt sätt än resten av färgningsteknikerna. I detta är det som förblir otömat strukturen som söks eller som man vill se; det vill säga mikroorganismer.

Därför är färgning baserad på färgning av smutsens botten en mörk färg. I det här scenariot kommer de kapslade strukturerna att stå ut i ljus eller färglös färg.

I allmänhet är jästarna uppfriskande, omgiven av en klar gloria som motsvarar kapseln. Detta inträffar på grund av att Indien-bläck och nigrosin är ämnen som inte kan tränga igenom polysackariden som utgör kapseln av levande mikroorganismer.

Det är värt att notera att andra strukturer som kan finnas i det direkta provet, såsom leukocyter eller röda blodkroppar, inte penetrerar heller.

Men om mikroorganismerna är döda kan färgämnet tränga in i dem, så att denna färgning också är användbar för att utvärdera mikroorganismernas livskraft.

Metod

material

nigrosin

Nigrosine är skyldig den svarta färgen som den har. Det är ett syntetiskt ämne som erhålls genom upphettning av blandningen av organiska föreningar - såsom nitrobensin, anilin och anilinhydroklorit - med användning av en katalysator (järn eller koppar) i nämnda reaktion.

Kinesiskt bläck

Kinesiskt bläck är ett ämne som främst används av asiater för att skriva, göra konstverk och monokromatisk målning. Det är mycket populärt i kinesisk kultur.

Det erhålls från bläckfiskbläck blandat med pulveriserat träkol, produkten från brinnande låghartsartade träd.

Det är också möjligt att framställa det från sot från förbränning av kolväten (vegetabiliska oljor), tillsammans med en proteingelatin som ger den rätt konsistens för att undvika utfällning av kolpartiklar.

Specifikationer för provtagning

- Det kräver inte fasta.

- CSF, sputum eller sterilt vätskeprov måste innehålla minst 1 ml volym och måste överföras omedelbart till laboratoriet vid rumstemperatur.

- CSF och sterila vätskeprover måste tas av en specialiserad läkare.

- Det kan också vara en ren kultur av en misstänkt stam kopplad till de nämnda patogenerna.

Utförande av tekniken med direkta prover

- Proverna måste centrifugeras, sedan kasseras supernatanten och sedimentet tas.

- En droppe av det centrifugerade materialet (sediment) och en droppe indiafärg eller nigrosin placeras på en ren bild.

- Det bör blandas väl och täckas med ett täckglas, så att droppen kan spridas som en tunn film utan att gå över kanterna.

- Därefter monteras beredningen på mikroskopet.

- Om beredningen är för mörk kan den spädas med vatten.

Utförande av tekniken med stammar från kultur

- En mycket liten del av en ung kultur tas med en såddnål och upplöses i en droppe indiafärg som tidigare placerats på en ren bild.

- Ett täckglas placeras ovanpå.

- Det observeras i mikroskopet vid 10X och sedan vid 40X.

Du kan också lösa upp en del av kolonin i destillerat vatten och därifrån ta en droppe och blanda den med Indien-bläcket. På detta sätt kommer beredningen inte att vara så tjock, vilket gör det möjligt att observera strukturerna isolerat; om det finns folkmassor kommer det inte att observeras väl.

En annan metod är följande:

- Placera en droppe av upphängningskulturen på den ena änden av bilden.

- Placera en droppe nigrosin i samma ände och blanda.

- Sprid provet med hjälp av en annan bild som om det gör en hematologisk smet.

- Låt torka och observera under mikroskopet.

Mikroskopobservation

Du måste först fokusera med ett 10X-mål för att ha en bred syn på fältet. Därefter bör man söka om det finns tydliga utrymmen; om det finns, fokusera 40X för att se detaljer.

Fördel

- Det är lätt att utföra.

- Det är en billig teknik.

- Denna metod kräver inte att smetet fixeras på värme eller med kemikalier. därför observeras mikroorganismer utan snedvridning.

- Det färska preparatet behöver inte torkas, så det kan observeras omedelbart, vilket ger resultat snabbt.

Nackdel

När de har monterats måste färska preparat observeras omedelbart; om de får torka är det inte längre möjligt att observera dem och en ny måste installeras.

Vävfärgning med indisk färg

En annan funktion som Indiens bläck kan utföra är i patologilaboratorier. Detta appliceras på kirurgiskt extraherade vävnadsprover för att markera tumörens resektionsmarginaler.

Den markerade vävnaden sprayas med ättiksyra. Detta fungerar som en mordant och förhindrar att bläck läcker ut när vävnaden utsätts för rutinbehandling för biopsipreparat.

Proceduren består av att bada vävnaden i alkohol och xylen och sedan blötlägga den i paraffinvax. Denna markering vägledar patologen när man observerar vävnaden och indikerar var den kirurgiska resektionsmarginalen eller annan intressepunkt är.

referenser

1. «Nigrosina». Wikipedia, den fria encyklopedin. 11 jul 2017, 22:46 UTC. 6 jan 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Kinesiskt bläck". Wikipedia, den fria encyklopedin. 1 okt 2018, 03:08 UTC. 6 jan 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J och kollaboratörer. (2006). Arbetstagare i den autonoma gemenskapen Extremadura. Särskild dagordning Volym IV. Redaktör MAD. Sevilla-Spanien, sid 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006). Specialist i laboratorietekniker, galicisk hälsovård (SERGAS). Specifik ämnesagenda volym 2. Redaktionell MAD. Sevilla-Spanien, s. 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiologisk diagnos. 12 utg. Argentina. Redaktionell Panamericana SA